Práctica 6: Medios de cultivo

INTRODUCCIÓN:

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo óptimo de microorganismos. Sirven para identificar bacterias o para estudios de sensibilidad.

En esta práctica se va a realizar un medio sólido y otro líquido. La diferencia es que el medio sólido contiene agar, que es un medio solidificante, mientras que el medio líquido no lo tiene.

En general, todos los medios de cultivo deben contener fuentes de carbono, nitrógeno, azufre y fósforo.

OBJETIVOS:

• Elaborar un medio de cultivo que permita el crecimiento de los microorganismos.
• Entender los componentes que forman parte de un medio de cultivo.

MATERIALES:

• Placa de Petri (medio sólido, 25 ml).

• Tubo base cónica (medio líquido, 10 ml).

• Campana extractora (Botón FAN - luz ultravioleta (10-15 min) - luz de trabajo).

• Mechero de alcohol.

• Matraz Erlenmeyer.

• Pesa sustancias.

• Cucharilla.

• Báscula.

• 2 probetas, una de 10 ml y otra de 25 ml.

• 2 pipetas de vidrio, una de de 10 ml y otra de 25 ml.

• Papel de celulosa.

• Mortero.

• Microondas.

• Glucosa 1,2%.

• Azufre (extracto de carne 2%).

• Nitrógeno (peptona, 0,5%).

• Fósforo (PBS, 30%).

• Agar (solo para el medio sólido).

• Agua destilada.

PROCEDIMIENTO:

Procedimiento para un medio sólido en Placa de Petri:

1. Se necesita preparar 25 ml, ya que esa es la capacidad que tiene la placa, así que se comienza calculando las cantidades que se necesitarán de cada producto.

• Glucosa: 25 ml * (1,2 g/100ml) = 0,3 g de glucosa.

• Nitrógeno (peptona): 25 ml * (0,5g/100ml) = 0,125 g de peptona.

• Azufre (extracto de carne): 25 ml * (2g/100ml) = 0,5 gramos de extracto de carne.

• Fósforo (PBS): 25 ml * (30g/100ml) = 7,5 gramos de PBS.

• Agar: 25 ml * (1,8g/100 ml) = 0,45 gramos de agar.

2. Una vez está todo listo, se junta todo en el matraz Erlenmeyer hasta que esté todo homogenizado y  se lleva al microondas, donde se debe de calentar durante 1 minuto (o menos si se observa que entra en ebullición).

Aclaración: En este paso no se añade el agar, se deja apartado para más adelante.

3. Se cogen dos trozos de papel, uno para colocarlo en forma de bola en el cuello del matraz para evitar la contaminación del medio al sacarlo del microondas, y otro papel para colocarlo alrededor del cuello del matraz para no sufrir ninguna quemadura.

4. Cuando se vaya a proceder a trabajar en la campana, se coge una placa de Petri y se marcará con el nombre del grupo en la base (nunca se pone el nombre en la tapa).

5. Se quita la pelota de papel del cuello del matraz, se flamea la boca del Erlenmeyer en el mechero de alcohol, se introduce el agar y se homogeniza.

6. Para finalizar se vertirá el contenido del Erlenmeyer en la placa y se debe dejar reposar.

Procedimiento de un medio líquido en un tubo de base cónica:

1. La capacidad del tubo son 10 ml, así que se debe de ajustar las cantidades. Y al ser un medio líquido se elimina el agar de los materiales.

• Glucosa: 10 ml * (1,2 g/100ml) = 0,12 g de glucosa.

• Nitrógeno (peptona): 10 ml * (0,5g/100ml) =0,05 g de peptona.

• Azufre (extracto de carne): 10 ml * (2g/100ml) = 0,2 gramos de extracto de carne.

• Fósforo (PBS): 10 ml * (30g/100ml) = 3 g de PBS.

2. Una vez está todo listo, se junta todo en el matraz Erlenmeyer, se homogeniza y se lleva al microondas, donde se debe de calentar durante 1 minuto (o menos si se observa que entra en ebullición).

3. Se cogen dos trozos de papel, uno para colocarlo en forma de bola en el cuello del matraz para evitar la contaminación del medio antes de llegar a la campana, y otro papel para colocarlo alrededor del cuello del matraz para no sufrir ninguna quemadura.

4. Al comenzar a trabajar en la campana, se coge el tubo de base cónica y se marca con el nombre del grupo en un lateral.

5. Se flamea la boca del matraz con el mechero de alcohol, se vierte el contenido en el tubo y se deja enfriar.

En el siguiente vídeo se puede observar al grupo pesar las cantidades antes descritas para realizar un medio de cultivo sólido.

RESULTADOS:

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

El medio de cultivo sólido en placa de Petri salió bien, mientras que el medio de cultivo líquido no dió tiempo a terminarlo, solo se pudieron pesar los ingredientes.

Así debería verse el medio de cultivo líquido si se hubiese terminado: