Práctica 4: Tinción de Ziehl-Neelsen

INTRODUCCIÓN:

La tinción de Ziehl-Neelsen es una tinción diferencial que permite distinguir un grupo especial de bacterias, cuya pared presenta resistencia a la decoloración por una mezcla de ácido y alcohol: las BAAR o bacterias acido-alcohol resistentes. Cabe destacar que todos los géneros pertenecientes a este grupo de bacterias son Bacilos.

OBJETIVO:

• Aprender a realizar la tinción de Ziehl-Neelsen.

MATERIALES:

• Portaobjetos.
• Campana extractora (Botón FAN - luz ultravioleta (10-15 min) - luz de trabajo).
• Pinza de madera.
• Placa de petri con la bacteria Mycobacterium phlei.
• Microscopio.
• Botes de tinción: fucsina ácida, alcohol ácido, azul de metileno.
• Asa de siembra desechable.
• Cubeta de tinción.
• Pipeta Pasteur.
• Vaso de precipitados con agua destilada.
• Mechero de alcohol x2 (uno en la campana y otro en la mesa de trabajo).

PROCEDIMIENTO:

1. En la campana se coge una gota de agua destilada con una pipeta Pasteur y la ponemos en el porta.
2. Se abre la placa de Petri con la M. phlei y con un asa de siembra desechable se cogen varias colonias.
3. Se extienden las bacterias junto con la gota de agua destilada a lo largo del porta.
4. Se desecha el asa y se colocan unas pinzas de madera en un extremo del porta.
5. Se pasa el porta por encima de la llama de un mechero de alcohol hasta que la gota se seque, y entonces se habrán fijado las bacterias.
6. Se coloca otro mechero de alcohol encendido en la mesa junto a la cubeta de tinciones.
7. El protocolo de los tintes es el siguiente:

• Fucsina ácida - 10 minutos flambleando la muestra.
• Alcohol ácido - 3 minutos.
• Azul de metileno - 1 minuto.

Observación: Cuando se esté con la fucsina ácida sobre el mechero de alcohol, no se puede ni secar mucho ni entrar en bullición. Si se empieza a secar, se quita de encima de la llama para colocarlo encima de la cubeta, se echa un poco más de tinte, y se sigue flambeando.

Entre cada tinte se debe quitar el exceso con agua destilada. Una vez terminada la tinción se deja secar al aire libre y se observa al microscopio.

Ahora se puede observar al grupo realizando el procedimiento de la práctica.

RESULTADOS:

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

Al observar todo de color azul se puede decir que el resultado de la tinción es negativo, ya que cuando hay bacterias ácido-alcohol resistentes, estas se pueden observar de color rojo. Una compañera compartió las siguientes fotos de un resultado positivo.

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